單細(xì)胞分離和mRNA標(biāo)記流程

更新時(shí)間：2025-04-15 點(diǎn)擊次數(shù)：139

單細(xì)胞表達(dá)分析系統(tǒng)更有效的測(cè)序可以更低的成本實(shí)現(xiàn)更高的通量：由于與高通量實(shí)驗(yàn)方法相關(guān)的測(cè)序成本，單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)往往非常昂貴。BD Rhapsody單細(xì)胞分析系統(tǒng)設(shè)計(jì)有多個(gè)功能，可以更有效地利用測(cè)序來(lái)降低實(shí)驗(yàn)成本。

靶向測(cè)定-由于檢測(cè)靈敏度的提高，特定的基因組合方法可使用少量的時(shí)間和成本，幫助產(chǎn)生類(lèi)似于全轉(zhuǎn)錄組分析（Whole Transcriptome Analysis，WTA）測(cè)定的結(jié)果。這種方法還提高了UMI計(jì)數(shù)效率，從而極大程度的節(jié)省了實(shí)驗(yàn)時(shí)間和成本。

儲(chǔ)存-從樣本中得到的完整cDNA可在磁珠上穩(wěn)定存儲(chǔ)，允許將珍貴樣本保存長(zhǎng)達(dá)16周。這可使用戶(hù)在時(shí)間允許的情況下靈活地對(duì)樣本進(jìn)行測(cè)序，并通過(guò)對(duì)儲(chǔ)存的磁珠池進(jìn)行等分或分樣來(lái)實(shí)現(xiàn)同一樣本的多個(gè)測(cè)定。

分樣-在磁珠上儲(chǔ)存的cDNA可以分成一個(gè)或多個(gè)等分試樣，并使用定制或預(yù)先設(shè)計(jì)的組合（panel）進(jìn)行擴(kuò)增。通過(guò)提供對(duì)部分樣本進(jìn)行測(cè)序的選項(xiàng)和對(duì)樣本不同組合（panel）進(jìn)行測(cè)試的靈活性，分樣可降低成本。

單細(xì)胞分離和mRNA標(biāo)記流程：

1.在微孔中，一個(gè)細(xì)胞與一個(gè)條碼標(biāo)記磁珠匹配

2.裂解細(xì)胞將mRNA與磁珠上條碼標(biāo)記的捕獲寡核苷酸雜交

3.磁珠回收

4.cDNA合成

5.測(cè)序和構(gòu)建單細(xì)胞基因表達(dá)譜